荧光原位杂交
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荧光原位杂合(fluorescent in situ hybridization,FISH) 是一种细胞遗传学技术,可以用来对核酸进行检测和定位。荧光标记的核酸探针只和具有高度相似性的核酸杂合,可用于染色体上基因的定位,或在分子生态学中用来标记不同分类细菌或古菌中的核糖体RNA。
在医院的妇产科或相关检验所中,会利用荧光原位杂合技术来判别胎儿的染色体是否正常。
对于利用rRNA的荧光原位杂合来说,如下原因可导致较低的荧光信号强度:
- 较低的细胞核糖体含量
- 较低的细胞周边的通透性
- 较低的目标序列可接触性(由于rRNA的折叠产生的构象,有些位置与rRNA分子内其他链或其他rRNA或蛋白紧密接触,从而使探针无法和目标序列杂合)
为检验细胞中的目标序列是否容易被探针杂合,及测试最佳杂合温度,可利用“克隆荧光原位杂合”(clone-FISH)进行试验:将rRNA基因结合入质粒,转化至大肠杆菌中表达,构成核糖体,再用荧光标记的探针杂合。
FISH可与流式细胞术联用,对特定荧光标记的细胞进行计数或者分离。