Top Qs
Chronologie
Chat
Contexte

Milieu chromogène

De Wikipédia, l'encyclopédie libre

Remove ads

Les milieux chromogènes sont très utilisés en microbiologie pour la mise en évidence d'activités enzymatiques par l'apparition d'une coloration spécifique. Leur introduction au laboratoire doit beaucoup à Alain Rambach.

La coupure par l'enzyme d'un substrat dit chromogène produit une molécule colorée, le chromophore. Pour les milieux chromogènes, le chromophore précipite au niveau de la colonie. Cette technique est différente de la mise en évidence d'activités par l'action des produits de la rédaction sur un indicateur de pH, rarement un indicateur rédox, du milieu.

Remove ads

Exemples

Résumé
Contexte

Le premier chromogène rencontré est l'ONPG (orthonitrophénylgalactoside) dont l'hydrolyse, par la β-galactosidase (ou ONPG-hydrolase) libère l'ONP (orthonitrophénol ou 2-nitrophénol) de coloration jaune. De très nombreuses enzymes sont mises en évidence par ce type de technique.

La diffusion de l'utilisation de chromogènes est devenue très importante par leur incorporation dans les milieux de culture : les colonies sont ainsi colorées par le ou les chromophore(s). Des colonies sont naturellement colorées ; la lecture est alors complexe car les couleurs peuvent s'additionner.

L'association de plusieurs chromogènes est souvent réalisée, par exemple la recherche de la β-glucuronidase et de la β-glucosidase dans les milieux destinées à l'analyse des urines en biologie médicale. D'autres enzymes sont recherchées pour les urines comme dans le milieu UTI (voir image ci-dessous)

Milieu URI

Deux types de colonies sur URI. Les colonies rouges sont β-galactosidase +, coliformes probables. Les petites colonies bleues sont β-glucosidase + et sont des Enterococcus. Les grosses colonies bleues peuvent être des Klebsiella-Enterobacter-Serratia.

Thumb
Deux types de colonies sur URI. Les colonies rouges sont β-galactosidase +, coliformes probables. Les petites colonies bleues sont β-glucosidase + et sont des Enterococcus. Les grosses colonies bleues peuvent être des Klebsiella-Enterobacter-Serratia.

Milieu CPSE

Milieu adapté au diagnostic des infections urinaires, par la mise en évidence d'une activité β-glucuronidase, il permet une identification directe d'Escherichia coli responsable de 80 % des cystites en France (40 % à l’hôpital), il permet aussi la mise en évidence de l'activité β-glucosidase chez les entérocoques et certaines entérobactéries (Klebsiella, Enterobacter, Serratia et Citrobacter). Orientation possible vers Proteus grâce à la mise en évidence de l'activité TDA par addition d'une goutte de chlorure de fer III. La production d'indole est mise en évidence éventuellement par une goutte de réactif (Kovacs par exemple). Dans certaines compositions, du fer III dans le milieu visualise directement la TDA par une couleur brune autour des colonies TDA +.

Thumb
Thumb
Proteus (TDA+) sur CPSE.

Milieu Chromagar pour les levures

Autre exemple avec le milieu Chromagar pour les levures.

Thumb
Isolement de levures sur Chromagar (à compléter de la nature des enzymes et l'identification correspondante).

Milieu SALM 

Milieu sélectif des bactéries à Gram négatif qui permet la mise en évidence de Salmonella dans les selles grâce à la révélation d'une activité estérase que spécifique des salmonelles.

Thumb
Salmonella enterica enterica sérotype Enteritidis isolé sur SM2 à partir d'une coproculture.

CAN2 

Milieu sélectif des levures qui permet la mise en évidence de Candida albicans par la mise en évidence de l'activité hexosaminidase.

Thumb
Culture de Candida albicans sur CAN2.
Remove ads

Milieux existants

Résumé
Contexte

De nombreux milieux chromogènes existent. Malheureusement, les fabricants ne donnent pas toujours le nom des activités enzymatiques recherchées mais seulement les couleurs obtenues. Les tableaux ci-dessous (en préparation) tente une approche exhaustive qui devra être complétée.

Davantage d’informations Enzymes recherchées, Taxons correspondants ...

Les milieux chromogéniques sont composés pour assurer la culture et une sélection, aussi importante que possible, des microorganismes cibles.

Davantage d’informations Nom du milieu, Enzymes recherchées ...
Remove ads

Nature des chromophores

Les chromogènes et les chromophores ne doivent pas être toxiques pour les bactéries recherchées, à la concentration utilisée.

Un exemple de chromophore pour la β-glucuronidase :

Thumb
4-Méthylumbeliferone-bêtaglucuronide.

Mais d'autres substrats sont possibles pour cette enzyme probablement en raison des droits de brevets.

Autres exemples de chromogènes
Thumb
4-Méthyl-umbelliférone, ex. : 4-méthylumbelliféryl-β-glucuronide.
Thumb
Alizarine (elle peut être substituée), ex. : alizarine-β-glucuronide.
Thumb
Radical indoxyl, ex. : avec substitutions possibles :
* le 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-glucuronide ;
* le 5-bromo-6-chloro-3-indolyl-β-glucuronide ;
* le 6-chloro-3-indolyl-β-glucuronide.
Formule à déterminer, probablement protégée par le secret industriel, ex. : aldol-β-glucuronide Formule à déterminer

Cyclohexènoesculetine-β-glucuronide

Bibliographie

  • Catherine de Beaumont, Intérêt des milieux chromogènes en microbiologie, 2006.
  • Jean-Noël Joffin et Guy Leyral, Dictionnaire des techniques, Microbiologie technique, CRDP d'Aquitaine (voir www.reseau-canope.fr/).
  • Alain Rambach, Opéron no 102, article de l'initiateur des milieux chromogènes.

Notes et références

Loading related searches...

Wikiwand - on

Seamless Wikipedia browsing. On steroids.

Remove ads