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Milieu chromogène
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Les milieux chromogènes sont très utilisés en microbiologie pour la mise en évidence d'activités enzymatiques par l'apparition d'une coloration spécifique. Leur introduction au laboratoire doit beaucoup à Alain Rambach.
La coupure par l'enzyme d'un substrat dit chromogène produit une molécule colorée, le chromophore. Pour les milieux chromogènes, le chromophore précipite au niveau de la colonie. Cette technique est différente de la mise en évidence d'activités par l'action des produits de la rédaction sur un indicateur de pH, rarement un indicateur rédox, du milieu.
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Exemples
Résumé
Contexte
Le premier chromogène rencontré est l'ONPG (orthonitrophénylgalactoside) dont l'hydrolyse, par la β-galactosidase (ou ONPG-hydrolase) libère l'ONP (orthonitrophénol ou 2-nitrophénol) de coloration jaune. De très nombreuses enzymes sont mises en évidence par ce type de technique.
La diffusion de l'utilisation de chromogènes est devenue très importante par leur incorporation dans les milieux de culture : les colonies sont ainsi colorées par le ou les chromophore(s). Des colonies sont naturellement colorées ; la lecture est alors complexe car les couleurs peuvent s'additionner.
L'association de plusieurs chromogènes est souvent réalisée, par exemple la recherche de la β-glucuronidase et de la β-glucosidase dans les milieux destinées à l'analyse des urines en biologie médicale. D'autres enzymes sont recherchées pour les urines comme dans le milieu UTI (voir image ci-dessous)
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Milieux existants
Résumé
Contexte
De nombreux milieux chromogènes existent. Malheureusement, les fabricants ne donnent pas toujours le nom des activités enzymatiques recherchées mais seulement les couleurs obtenues. Les tableaux ci-dessous (en préparation) tente une approche exhaustive qui devra être complétée.
Les milieux chromogéniques sont composés pour assurer la culture et une sélection, aussi importante que possible, des microorganismes cibles.
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Nature des chromophores
Les chromogènes et les chromophores ne doivent pas être toxiques pour les bactéries recherchées, à la concentration utilisée.
Un exemple de chromophore pour la β-glucuronidase :

Mais d'autres substrats sont possibles pour cette enzyme probablement en raison des droits de brevets.
![]() |
![]() |
![]() * le 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-glucuronide ; * le 5-bromo-6-chloro-3-indolyl-β-glucuronide ; * le 6-chloro-3-indolyl-β-glucuronide. |
Formule à déterminer, probablement protégée par le secret industriel, ex. : aldol-β-glucuronide | Formule à déterminer
Cyclohexènoesculetine-β-glucuronide |
Bibliographie
- Catherine de Beaumont, Intérêt des milieux chromogènes en microbiologie, 2006.
- Jean-Noël Joffin et Guy Leyral, Dictionnaire des techniques, Microbiologie technique, CRDP d'Aquitaine (voir www.reseau-canope.fr/).
- Alain Rambach, Opéron no 102, article de l'initiateur des milieux chromogènes.
Notes et références
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