Спиртова преципітація

Спиртова́ преципіта́ція, або спиртове́ оса́дження (англ. Ethanol precipitation), — метод, що використовується для очищення і концентрації ДНК. Молекула ДНК є полярною і легко розчиняється в полярній воді. Засновуючись на принципі «розчинності у подібному», ДНК нерозчинна в неполярному етанолі, або навіть у суміші етанолу з водою, через зменшення кількості доступних молекул води.

У цьому методі ДНК спочатку преципітують (осаджують), додаючи великий об'єм 100 % етанолу, часто для збільшення ефективності преципітації розчин охолоджують на льоду або у морозильнику. В результаті ДНК та солі, що формують з нею іонні зв'язки, преципітуються з розчину. Суспензія потім осаджується за допомогою центрифугування в мікроцентрифузі із коефіцієнтом вільного падіння ~12 тис. g, залишаючи осад ДНК.

На наступному кроці, осад ДНК промивають 70 %-80 % етанолом і знову осаджують. Це дозволяє розчинити солі та значно зменшити їх концентрацію. Після завершення цього кроку ДНК висушують у повітрі або у вакуумі.

Замість етанолу також може використовуватися ізопропанол, ефективність преципітації за допомогою ізопропанолу дещо вища. Проте, ізопропанол менш леткий, ніж етанол, тому висушування ДНК на останньому кроці займає більше часу.

Література

• Zeugin JA, Hartley JL (1985). Ethanol Precipitation of DNA (PDF). Focus. 7 (4): 1—2. Процитовано 10 вересня 2008.
• Crouse J, Amorese D (1987). Ethanol Precipitation: Ammonium Acetate as an Alternative to Sodium Acetate (PDF). Focus. 9 (2): 3—5. Архів оригіналу (PDF) за 22 листопада 2009. Процитовано 10 вересня 2008.

Посилання

• The Basics: How Ethanol Precipitation of DNA and RNA Works