酶譜法

酶譜法或酶譜（英語：Zymography）是一種基於酶的底物庫來檢測水解酶的凝膠電泳技術。使用三種類型的酶譜法；凝膠酶譜法、原位酶譜法和體內酶譜法中。^[2]例如，嵌入聚丙烯酰胺凝膠中的明膠將被凝膠中運行的活性明膠酶消化。考馬斯亮藍染色後，退化區域在深色染色背景下顯示為清晰的條帶。^[3]

諾氏瘧原蟲的天冬酰胺內肽酶印記.^[1]

酶譜一詞的現代用法已經被用來定義發酵產品的研究和編目，例如啤酒或葡萄酒，通常由特定的釀酒師或在確定的發酵類別中進行，例如使用特定的酵母菌株或細菌種類。酶譜也指相關的發酵產品的集合，被視為一個作品集。例如，特定啤酒廠生產的所有啤酒都可以統稱為其酶譜。

另見酶學（又稱酶譜應用科學）。酶學涉及發酵的生化過程，特別是釀造、釀酒和其他發酵食品中發酵酵母和細菌的選擇。例如，啤酒釀造涉及應用頂部（淡啤酒）或底部發酵酵母（啤酒），以生產所需的各種啤酒。酵母的合成會影響啤酒的風味特徵，即雙乙酰（黃油、奶油糖果的味道或香氣）。

凝膠酶譜法

用於SDS-PAGE的樣品將在標準非還原加載緩衝液中製備。在這過程中不需要還原劑或將其煮沸，因為它們會干擾酶的重新摺疊。在丙烯酰胺凝膠的製備過程中，將合適的底物（例如用於蛋白酶檢測的明膠或酪蛋白）包埋在分離膠中。電泳後，通過在未緩衝的曲拉通X-100中孵育從而將凝膠（或酶譜）中的十二烷基硫酸鈉去除，然後在適當的消化緩衝液中孵育，以便在37°C下的最佳時間長度孵育。隨後對酶譜進行染色（通常使用氨基黑10B或考馬斯亮藍），消化區域顯示為清晰的條帶，而底物已被酶降解的則呈現深色染色背景。

標準協議的變體

標準方案可能需要根據樣品酶進行修改；例如，黑腹果蠅消化糖苷酶通常在還原條件下（即存在2-巰基乙醇或二硫蘇糖醇）以及在一定程度上加熱條件下存活。事實上，加熱到50°C後的分離往往會表現出條帶分辨率的顯着增加，而沒有明顯的活性損失。^[4][5]

過去用於α-澱粉酶活性酶譜分析的常用方案也就是所謂的W.W.多恩澱粉膜方案。這裡運行天然PAGE凝膠以分離勻漿中的蛋白質。隨後，將其中溶解（或更準確地說，懸浮）澱粉的薄凝膠覆蓋在原始凝膠上一段時間。^[6]然後用盧戈氏碘液對澱粉染色。

凝膠酶譜通常用於檢測和分析微生物產生的酶。^[7]這導致了標準協議的變化，例如混合底物酶譜法。^[8]

反向酶譜將底物和酶與丙烯酰胺共聚，可用於證明酶抑制劑的活性。染色後，抑制區域可視化為透明（或輕微染色）背景下的暗條帶。

在印記技術中，酶通過非變性凝膠電泳分離，凝膠置於底物處理過的洋菜上。^[9]

酶譜法也可應用於其他類型的酶，包括木聚糖酶、脂肪酶和幾丁質酶。

參見

• SDS-PAGE