Taq聚合酶
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Taq聚合酶是由钱嘉韵于1976年从嗜热细菌水生栖热菌中分离出的DNA聚合酶[1]。Taq聚合酶的常用简称有Taq Pol(或Taq酶)。Taq酶常用于放大短DNA片段的聚合酶链式反应中(PCR)。
Quick Facts Taq聚合酶,外切酶, 鉴定 ...
Taq聚合酶,外切酶 | |||||||||
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结合在DNA八聚体上的DNA聚合酶 | |||||||||
鉴定 | |||||||||
标志 | Taq-exonuc | ||||||||
Pfam | PF09281(旧版) | ||||||||
InterPro(英语:InterPro) | IPR015361 | ||||||||
SCOP(英语:Structural Classification of Proteins) | 1qtm / SUPFAM | ||||||||
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Quick Facts Taq外切酶, 鉴定 ...
Taq外切酶 | |||||||||
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DNA聚合酶 | |||||||||
鉴定 | |||||||||
标志 | Taq-exonuc | ||||||||
Pfam | PF09281(旧版) | ||||||||
InterPro(英语:InterPro) | IPR015361 | ||||||||
SCOP(英语:Structural Classification of Proteins) | 1qtm / SUPFAM | ||||||||
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水生栖热菌生活在温泉与深海热泉中,从其中分离的Taq酶可承受PCR中所需要的高温[1][2]。因此Taq酶取代了原先用于PCR中的大肠杆菌DNA聚合酶[3]。Taq酶的最适活性温度为75–80°C,在92.5°C时半衰期高于2小时,95°C时为40分钟,97.5°C时为9分钟;Taq酶可在72°C时于10秒内复制一含有1000个碱基对的DNA[4]。
Taq酶的缺点之一是缺乏从3'端到5'端的外切酶校正活性[4],从而导致Taq在复制时保真度不高。原先测得的错误率为每9000个核苷酸中出现1次错误[5]。
为了降低出错的几率,科学家陆陆续续发现了其他可以取代Taq聚合酶的聚合酶。举例来说,Pfu是具有3'至5'端外切酵素特性的聚合酶,出错几率约为1/2.6x1000000。但相较于Taq聚合酶,Pfu合成DNA的速度较慢,因此也有混合使用的配方被制作出来。近期的电脑模拟技术以及新兴生物技术,也能透过人工修改Taq酶的结构来增强性能,购买这些商业化的酶可以降低实验的错误率。
Taq聚合酶有一个特性除了合成速度快、出错率高以外,还会使合成的产物“末端带有一个A碱基”,TA克隆即是利用Taq聚合酶此特性,Taq的PCR产物在3'末端会多出一个A,此时只须有一个与其互补的T表现在质体上,即能彼此靠近,借由接合酶连接起来。透过此方式,可省去限制酶剪切的时间,直接利用PCR产物与质体彼此有互补两端的特性,可快速黏合起来。