Kompenzace fluorescence

Kompenzace fluorescence je matematická korekce přesvitu emisního spektra fluoroforu do jiného kanálu ^{[1] [2]}

Světlo fluorochromu vyzářené po excitaci příslušným laserem prochází optickým filtrem na detektor. Pokud je více fluorochromů excitováno stejným laserem, dochází pak k přesvitu. Poprvé kompenzaci dat z průtokového cytometru provedl v roce 1977 Michael Loken et al. na dvoubarevném experimentu, kdy byly myší splenocyty barveny fluoresceinem a rhodaminem.^[3]

Při vícebarevných experimentech, kdy se emisní spektra některých z fluorochromů překrývají a jsou tedy měřena více detektory, je kompenzace nezbytná.^[4] Kompenzace se provádí pomocí analyzačních softwarů pro cytometrická data jako je FlowJo ^[5], FlowLogic^[6], Kaluza ^[7]a další.

Důležité jsou kompenzační kontroly – vzorky obarvené pouze jedním fluorochromem. Mohou jimi být buňky nebo se používají kompenzační kuličky. Dále jsou používány kontroly FMO (fluorescence minus one) které slouží ke správnému gatování populací. ^[8]