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克列諾片段
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克列諾片段(Klenow fragment)或稱克列諾酶(Klenow enzyme),是漢斯·克列諾1970年用枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)處理大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ時,得到的兩個片段中分子量較大的一個,它含有605個胺基酸殘基(324~928),並有大小兩個結構域,其中大結構域(518~928)具有5'→3'聚合酶和3'→5'外切酶活性,小結構域(324~517)則具有5'→3'外切酶活性。[1]

exo-Klenow片段
在一些應用中,Klenow片段的3'→5' 核酸外切酶活性可能會干擾合成進行。於是可透過修改大腸桿菌Pol A基因(D355A,E357A)使其N端324個鹼基移除並失去3'→5' 核酸外切酶活性而保留5'→3'聚合酶活性,這種形式的酶稱為exo-Klenow片段[2]。 exo-Klenow片段用於微陣列的一些螢光標記反應,也可用於序列末端加上dA和dT,這是將DNA銜接子(Adapter)連接到DNA片段的過程中的重要步驟,經常用於製備用於次世代定序(NGS)的DNA文庫。
參考資料
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