EuroFlow

EuroFlow je asociace, která byla založena v roce 2005 jako EU-FP6 financovaný projekt, který byl odstartován na jaře roku 2006. Zpočátku bylo Euroflow tvořeno 18 dignostickými výzkumnými skupinami a dvěma SME (anglicky Small an Medium Enterprises, česky Malé a střední podniky), celkově z 8 různých evropských zemí, se vzájemně se doplňujícími znalostmi na poli průtokové cytometrie a imunofenotypizace leukémií. Během roku 2012 obě SME projekt opustily a EuroFlow tak zanechaly plně vědecky nezávislým. Cílem EuroFlow je inovace a standardizace průtokové cytometrie tak, aby došlo ke zlepšení a pokroku při diagnóze a individualizaci léčby pacientů trpících zhoubnými nádorovými onemocněními krevního původu (dále hematologické malignity, například leukémie a lymfomy).

Historie

Od 90. let se imunofenotypizace pomocí protilátek konjugovaných s fluorochromy a jejich následná detekce průtokovým cytometrem stala preferovanou metodou při diagnóze hematologických malignit. Výhodou této metody je rychlost a nenáročnost a také možnost detekovat vice jak 6 parametrů současně, dále také široká aplikovatelnost v lékařské diagnostice a přesné zaměření na nádorové populace. Vzhledem k rychlému vývoji nových protilátek, fluorochromů a mnohobarevných digitálních cytometrů se stalo důležitou otázkou, jak cytometrická data správně interpretovat a jak dosáhnout standardizovaných a srovnatelných výsledků mezi laboratořemi. I přesto, že byl zaveden jistý konsensus doporučení a směrnic, jednalo se jen o částečnou standardizaci, nebral se ohled na různé zdroje reagencií (hlavně klony protilátek, fluorochromy a jejich optimální kombinace) nebo na postup přípravy vzorků. Vzhledem k těmto mezilaboratorním rozdílům je cytometrie vnímána jako metoda vysoce závislá na odbornosti s limitovanou reprodukovatelností při studiích probíhajících ve více centrech.

Cíle Euroflow

• Vývoj a validace nových protilátek
• Zavedení nové technologie založené na kuličkových testech (sendvičové imunostanovení na kuličkách)
• Vývoj nových softwarových nástrojů a z toho plynoucí nové analytické přístupy pro rozpoznávání komplexních imunofenotypových vzorců
• Design nových vícebarevných protokolů a standardních operačních procedur (SOP)
• Vývoj a standardizace rychlé, přesné a vysoce citlivé průtokové cytometrie^[1]

Dosažené cíle

Během uplynulých let dosáhlo EuroFlow většiny svých cílů. Ustanovilo osmibarevné panely protilátek pro diagnostiku, klasifikaci a následné kontrolní vyšetření hematologických malignit^[2]. Panely jsou tvořeny testovací zkumavkou a několika doplňujícími charakterizačními zkumavkami a jsou založeny na zkušenostech a literatuře. Jsou i nadále optimalizovány a rozsáhle testovány na velkých souborech vzorků paralelně v několika výzkumných centrech konsorcia EuroFlow. Proběhla selekce fluorochromů i standardizace nastavení přístroje a laboratorních protokolů, tedy celkový vývoj standardizovaných operačních procedur^[3]. Klony protilátek a fluorochromy a další reagencie od různých výrobců byly podstoupeny detailnímu testování a srovnání. Zároveň byl pro analýzu těchto obsáhlých a komplexních dat vyvinutý software schopný multidimenzionálního statistického srovnávání dat normálních vzorků (zdravých kontrol) se vzorky pacientů^[4][5]. Dále byly vyvinuté nové klony protilátek proti pečlivě vybraným epitopům fúzních proteinů, které jsou typické pro chromozomální translokace (detekce nejfrekventovanějších fúzních proteinů) při akutních leukémiích a chronické myeloidní leukémie a byla zavedená detekce fúzních proteinů pomocí kuličkových testů^[6][7][8]