Salkowskijev test

Salkowskijev test, ponekod tudi kot Salkowski test, je kvalitativni kemijski test, ki se uporablja za dokazovanje prisotnosti holesterola in drugih sterolov.^[1][2][3] Ta biokemijska metoda je svoje ime dobila po nemškem biokemiku Ernstu Leopoldu Salkowskiju^[1], ki je znan predvsem po številnih novih testih, uporabljenih za detekcijo različnih molekul (poleg holesterola in drugih sterolov tudi kreatinina, ogljikovega monoksida, glukoze in indolov).^[4] Raztopina s pozitivno reakcijo Salkowskijevega testa se obarva rdečkasto z rumenim sijajem.^[5]

Osnovne informacije

Postopek

Za izvajanje Salkowskijevega testa so potrebni vzorec, ki ga želimo testirati za sterole, kloroform in koncentrirana žveplova kislina. Metoda se lahko izvede tako, da se v epruveto s kloroformom (denimo 2 mililitra^[5]) prilije (ali odpipetira) 2 mililitra izbranega vzorca, nakar se tako pripravljeni raztopini ob robu epruvete s kapalko doda 2 mililitra koncentrirane žveplove (VI) kisline. Raztopino se zatem s pomočjo tresenja zmeša.^[1][5] Ključno je, da se pri postopku uporablja zgolj suho steklovino, ker pride do dehidracijske reakcije.^[6]

Pozitivno reakcijo test pokaže tako, da gornji sloj (kloroform) v epruveti dobi modrikasto rdečo do vijolično barvo, medtem ko se plast žveplove kisline obarva rumeno do zeleno (viden je zelenkast sijaj^[7]). Pri negativni reakciji spremembe barve raztopine ni (prozorna raztopina ohrani svojo prozornost).^{[1][8][9][10]}

Salkowskijev test se lahko uporabi tudi za dokazovanje prisotnosti indolov (kristaličnih alkaloidov, ki nastajajo pri razpadu beljakovin, vsebujočih triptofan^[11]). V takšnem primeru se vzorcu doda dušikova kislina in 2-odstotni kalijev nitrit, na pozitivno reakcijo test opozori z rdečim obarvanjem.^[7]

Kemizem testa

Dodatek močno higroskopne žveplove kisline vzorcu holesterola, raztopljenega v kloroformu, vodi v dehidracijsko reakcijo (dve vodni molekuli se odstranita iz dveh molekul holesterola) in tvorbo dodatnih (alkenskih) dvojnih vezi. Med kemijsko reakcijo se med seboj povežeta dva sterola in nastane bisterol (bisteroid); v primeru holesterola bi-holestadien. Rdeča barva raztopine je posledica bisulfonske kisline, ki nastane kot produkt biholestadiena, ki ga sulfonira žveplova kislina.^[10][12][13]

Glej tudi

• sterol
• holesterol